comision de investigaciones científicas de la provincia de buenos
aires
INFORME CIENTÍFICO-TECNOLÓGICO[1]
PERIODO: 2001-2002
Legajo Nº: .........................................
1. APELLIDO:
CORTIZO................................................................................................................
NOMBRES:Ana María.............................................................................................
2. TEMA
DE INVESTIGACION
2.1. “Efectos
insulinomiméticos de diversos compuestos de vanadio sobre células en cultivo”
2.2. “Regulación
de la proliferación celular por productos avanzados de glicación”.
3. DATOS
RELATIVOS A INGRESO Y PROMOCIONES EN LA CARRERA
INGRESO: Categoría: ASISTENTE..................
Mes: . Febrero.......
Año: 1985.......................
ACTUAL: Categoría: . INDEPENDIENTE..
desde el mes:. Mayo.. Año: 1996...............
4. INSTITUCION
DONDE DESARROLLA LA TAREA
Nombre: Cátedra de Bioquímica Patológica - Facultad de
Ciencias Exactas...................
Dependencia: Universidad Nacional de La Plata (UNLP)......................................................
Dirección.Calle: 47 y
115...........................................................................
Nº..............................
Ciudad:. La Plata............................................Pcia: Buenos Aires..Tel: (0221) 423-5333 int. 49.
Dirección electrónica:. cortizo@biol.unlp.edu.ar...........................................................................
Cargo que ocupa:. Profesor Adjunto Dedicación Exclusiva ..................................................
5. DIRECTOR
DE TRABAJOS. (En el caso que corresponda)
Apellido y Nombres:
.....................................................................................................................
Dirección. Calle
............................................................................................................................
Ciudad:
................................................................... Pcia:
............................. Tel: .......................
Dirección electrónica:
...................................................................................................................
....................................................... ..................................................
Firma del Director
(si corresponde) Firma del Investigador
Fecha........../..05../.2003.
6. EXPOSICION
SINTETICA DE LA LABOR DESARROLLADA EN EL PERIODO. Debe exponerse, en no más de
una página, la orientación impuesta a los trabajos, técnicas y métodos
empleados, principales resultados obtenidos y dificultades encontradas en el
plano científico y material. Si corresponde, explicite la importancia de sus
trabajos con relación a los intereses de la Provincia.
6.1 “Efectos insulinomiméticos de diversos
compuestos de vanadio sobre células en
cultivo”
El
vanadio, un elemento de transición traza, promueve diversos eventos celulares,
tanto in vivo como in vitro. Estos compuestos actúan como
insulino- y factores de crecimiento-símiles y así se ha pensado que el vanadio
podría ser un potencial agente terapéutico para el tratamiento de ciertas
patologías como la Diabetes y la osteoporosis.
En
este período se estudió la influencia del vanadato y vanadilo sobre las
propiedades de fluidez de membranas de osteoblastos en cultivo y de vesículas
de fosfatidil colina. Para esto se usaron zondas como Merociana 540 y 1,6
difenilhexatrieno, con el objeto de detectar los cambios en la zona interfacial
y la zona hidrofóbica de membrana, respectivamente. El vanadato incrementó la
fluorescencia de Mero540, sugiriendo un menor orden de la hemicapa lipídica
externa. En contraste, el vanadilo disminuyó la fluorescencia de Mero540,
sugiriendo una estabilización del orden de las membranas. Ambos compuestos de
vanadio perturbaron solo levemente la zona hidrofóbica de la membrana. Los
resultados sugieren que ambos compuestos se adsorben a grupos de cabeza polar
de los fosfolípidos de membrana.
En
colaboración con el grupo del CEQUINOR, se sintetizaron y caracterizaron
compuesto de vanadio(IV) con diferentes ligando de interés biológico y
farmacológico. Uno de ellos es un complejo con aspirina (VOAspi). Se
investigaron las propiedades bioquímicas y los mecanismos de acción de este
complejo sobre dos líneas de osteoblastos en cultivo. Este compuesto parece ser
inductor del crecimiento más fuerte a bajas dosis que el progenitor vanadilo,
pero más tóxico a altas dosis (> 50 mM). Los mecanismos de acción
parecen involucrar el estrés oxidativo: la producción de especies de oxígeno
reactivas (ROS), la lipoperoxidación (TBARS) y la vía del óxido nítrico (NO).
También se encontró que este compuesto induce la expresión de Erk 1/2 y la
inhibición de diversas fosfoproteínas fosfatasas presentes en los extractos de
osteoblastos en cultivo.
Se
estudiaron también los efectos de complejos de vanadio(IV) con drogas
antiinflamatorias no esteroideas (ibuprofeno, naproxeno y tolmetin). En general
estos compuestos inhibieron al crecimiento de osteoblastos no transformados
MC3T3E1, mientras que no produjeron alteraciones en el crecimiento de un
osteosarcoma de rata. Sorprendentemente, el complejo con naproxeno (NapVO)
indujo un mayor efecto antiproliferativo en la línea tumoral UMR106. Estos resultados
nos han llevado a evaluar con más profundidad los efectos antitumorales del
NapVO en el osteosarcoma.
En un
trabajo colaborativo con el grupo de polímeros del Dr Alessandrini del INIFTA,
se diseñó y probó un sistema de liberación controlada de VOAspi usando un film
de poly-b-propiolactona.
Se analizó la cinética de liberación de la droga, el coeficiente de difusión y
la erosión del film. Se observó que los efectos tóxicos del VOAspi (evaluados a
través de alteraciones morfológicas y la lipoperoxidación) sobre los
osteoblastos fueron disminuidos cuando la liberación del compuesto ocurrió
desde el film, en comparación con la solución del complejo libre. Por otro
lado, el complejo embebido en el film retuvo sus propiedades antitumorales.
Asi, este sistema de liberación controlada podría tener aplicaciones biomédicas
y terapéuticas.
Todos
los resultados obtenidos fueron presentados en reuniones científicas nacionales
e internacionales y dieron origen a publicaciones (ver 7.1, 7.2 y 7.5).
6.2 “Regulación de la proliferación celular por
productos avanzados de glicación”
En
pacientes diabéticos crónicamente descompensados, se ha observado un aumento en
el contenido de proteínas modificadas por productos de glicación avanzada
(AGEs) en diversos tejidos, inclusive el hueso. Actualmente se cree que la
formación de estos productos se halla implicada en la patofisiología de las
complicaciones crónicas de la Diabetes.
En esta
etapa del proyecto investigamos el efecto de los AGE sobre la secreción del
factor de crecimiento insulino-simil I (IGF-I) y sus proteínas ligadoras (IGFBP) por osteoblastos UMR106 y MC3T3E1
en diferentes estadios de diferenciación. Estos estudios sugieren que la
modulación del crecimiento y desarrollo de los osteoblastos por proteínas modificas
por AGE podría ser el resultado de un mecanismo autocrino / paracrino
involucrando el sistema de IGF-I / IGFBPs. Por otro lado, se investigó el
efecto de una matriz de colágeno tipo I y su modificación por AGEs sobre la
adhesión, spreading, proliferación y diferenciación de osteoblastos en
cultivo. También se estudió el rol de las especies de oxígeno reactivas (ROS) y
la expresión de NO cintaza sobre los efectos inducidos por los AGEs. La
acumulación de AGE sobre el colágeno produjo un efecto deletéreo sobre el
crecimiento y desarrollo osteoblástico, el cual fue dependiente del estadio de
diferenciación osteoblástico e involucró la expresión de NOS y la vía de los
ROS. Finalmente se investigó la presencia y regulación de dos receptores para
AGEs particulares: RAGE y AGER-2 o galectina-3. Se analizó tambien si la via de
las Erk se halla comprometida en el mecanismos por el cual los AGEs afectan el
desarrollo osteoblástico a través de alguno de estos receptores.
Una
parte de este proyecto se realiza en colaboración con el Laboratorio del Dr
Gerardo Vasta, en Baltimore, USA. En el año 2002 realicé una pasantía de
trabajo donde aplique métodos de biología molecular con el fin de analizar y
cuantificar el mRNA de Gal-3 aislada de osteoblastos en cultivo. También
desarrollamos un sistema para clonar el gen de Gal-3 de osteoblastos de rata y
ratón, expresarlo, preparar y purificar la proteína para posteriormente
levantar un anticuerpo con la misma.
Los
resultados de todos estos estudios fueron presentados en congresos nacionales e
internacional y han sido publicados o enviados a publicar (ver item 7.1, 7.3 y
7.5).
Otros
Proyectos de Investigación
Biocompatibilidad de materiales dentales.
Este
proyecto colaborativo se inició hace dos años y se realiza con el grupo de la
Dra. Mónica F de Mele y la odontóloga M. C. Cortizo del INIFTA y Cátedra de
Materiales dentales de la Facultad de Odontología.
El
objetivo de este proyecto es evaluar la biocompatibilidad de materiales
metálicos usados en prótesis y ortodoncia, sobre osteoblastos en cultivo. Se
analizan los niveles de metales liberados al medio de cultivo y su correlación
con la citotoxicidad celular. El Cu y la Ag fueron los elementos que indujeron
los cambios morfológicos y los efectos tóxicos más marcados sobre los
osteoblastos. Así, el sistema de cultivos empleado parece ser un buen modelo
para evaluar la biocompatibilidad de los materiales dentales.
Los
resultados de este proyecto se han presentado en congresos nacionales e
internacionales y se han enviado a publicar (ver item 7.1, 7.3 y 7.5).
Desarrollo y aplicación de metodologías para
evaluar aterogenisidad.
Dentro
de nuestro grupo de trabajo en la Cátedra de Bioquímica Patológica, la Dra. A
Scoccia dirige un proyecto destinado a desarrollar métodos de diagnóstico y de
seguimiento de enfermedades aterogénicas, de aplicación en los laboratorios de
análisis clínicos. En el mismo participo como coordinadora y colaboradora.
Recientemente
se ha destacado la importancia de las modificaciones que sufren las partículas
de LDL en la patogenia de la aterosclerosis. Se desarrolló y estandarizó un
método para determinar la susceptibilidad a la oxidación de partículas de LDL
asiladas por precipitación selectiva. Este método fue estandarizado y aplicado
a una pequeña muestra de pacientes controles y diabéticos y se demostró su
utilidad como un posible marcador de riesgo aterogénico.
En otro estudio, se optimizó la
determinación de ácido siálico en LDL aislada por precipitación selectiva y se
establecieron relaciones entre componentes que podrían ser indicadores de
aterogenicidad. Se obtuvieron resultados sobre 30 muestras de personas
normolipémicas de ambos sexos. Los índices de composición propuestos podrían
ser usados como posibles indicadores de aterogenicidad, así como en la
evaluación clínica de tratamientos específicos.
Los
resultados de este estudio fueron presentados en un congreso nacional y han
sido aceptados para ser publicar. (Ver 7.3.3 y 7.5.14).
7. TRABAJOS
DE INVESTIGACION REALIZADOS O PUBLICADOS EN ESTE PERIODO.
7.1 PUBLICACIONES.
. A
continuación de cada cita bibliográfica, transcribir el resumen (abstract) tal
como aparece en el trebajo. La copia en papel de cada publicación, se
presentará por separado. A cada trabajo se le asignará un número. Debe hacer referencia
exclusivamente a aquellas publicaciones en las que haya hecho explícita mención
de su calidad de Investigador de la CIC (Ver instructivo para la publicación de
trabajos, comunicaciones, tesis, etc.). Toda publicación donde no figure dicha
mención no debe ser adjuntada porque no será tomada en consideración. A cada publicación, asignarle un número e Iindicar el
nombre de los autores de cada trabajo en
el mismo orden que figuran en ella, lugar donde fue publicadao, volumen, página y año, asignándole a cada uno un número.
A continuación, transcribir el resumen (abstract) tal como aparece en la
publicación. La copia en papel de cada publicación se presentará por
separado. ParaEn cada publicacióntrabajo, el investigador deberá,
además, aclarar el tipo o grado de
participación que le cupo en el desarrollo del trabajo mismo
y, para aquellaos en laos que considere que ha hecho
una contribución de importancia, deberá escribir una breve justificación.
7.1.1. “Effect of vanadium compounds on the lipid organization
of membranes”. Bakás L, Verza G,
Cortizo AM. Biol Trace Elemen Res 80, 269-279,
2001.
The influence of vanadate on the adsorption
properties of Merocyanine 540 (MC540) to UMR cells was studied by means of
specrofluorometry. An increment in the fluorescence was observed in the
osteoblasts incubated with 0.1 mM vanadate. This effect could be interpreted in
terms of vanadate inhibitory effects on aminotraslocase activity. However,
vanadate promotes a similar behavior to that found in UMR 106 cells when it was
added to lipid vesicles composed of phosphatidylcholine. The effect of vanadium
in different oxidation states, such as vanadate(V) and vanadyl(IV) on lipid
membrane properties was examined in large unilamellar vesicles by means of
spectrofluorometry employing different probes. Merocyanine 540 and
1,6-diphenylhexatriene were used in order to sense the changes at interfacial
and hydrophobic core of membranes, respectively. In contrast to vanadate,
vanadyl decreased the fluorescence of MC540. Both vanadium compounds slightly
perturbed the hydrocarbon core. The results can be interpreted by the specific
adsorption of both compounds on the polar head groups of phospholipid and
suggest a possible influence of vanadium compounds on the lipid organization of
cell membranes
7.1.2. “Effect of advanced glycation end products (AGE) on
the secretion of insulin-like growth factor I(IGF-I) and its binding
proteins(IGFBP): role in osteoblast development”. McCarhty AD, Etcheverry SB,
Cortizo AM. Acta Diabetol 38,
113-122, 2001.
In chronically uncompensated diabetes mellitus,
an increase has been observed in the content of advanced glycation endproduct
(AGE)-modified proteins in various tissues, including bone. This increase can
lead to a local imbalance in the secretion of cytokines and growth factors, and
has been implicated in the pathophysiology of the longterm complications of
diabetes. We have previously shown that the proliferation and differentiation
of UMR106 rat osteosarcoma and MC3T3E1 mouse calvaria-derived cell lines are
regulated by AGE-modified proteins, possibly through the recognition of these
AGEs by specific membrane-associated receptors. In the present study, we
investigated the effects of AGE-proteins on the secretion of insulin-like
growth factor-I (IGF-I) and its binding proteins (IGFBPs) by both
osteoblast-like cell lines. In the case of MC3T3E1 cells, this was studied
throughout their successive stages of development: proliferation,
differentiation and mineralisation. For every condition, cells were incubated
24 hours with increasing concentrations of either bovine serum albumin (BSA) or
AGE-BSA. IGF-I in conditioned media was separated from IGFBPs by acid gel
filtration-centrifugation, and measured by radioimmunoassay. IGFBPs in
conditioned media were analysed by a semi-quantitative western ligand blot. In
UMR106 cells, low doses of AGE-BSA significantly decreased the secretion of
both IGF-I (56% of control) and a 24 kDa IGFBP (80% of control). Results for
MC3T3E1 cells, which predominantly secrete 29 kDa IGFBPs, were dependent on the
stage of development. In proliferating preosteoblastic cells, AGE-BSA decreased
the secretion of IGF-I (34%-37% of control) while increasing the secretion of
IGFBP (124%-127% of control). On the other hand, secretion of these components
of the IGF system by mature (differentiated) cells was unaffected by the
presence of AGE-BSA. When these cells finally attained mineralisation,
incubation with AGE-modified BSA provoked an increase both in IGFBP (131%-169%
of control) and in IGF-I secretion (119%-123% of control). The presented
evidence suggests that the modulation of growth and development by AGE-modified
proteins, previously described for both cell lines, could be the result of an
autocrine-paracrine mechanism involving the IGF-IGFBP system.
7.1.3. “A vanadium/aspirin complex controlled release using a
poly(b-propiolactone) film. Effects on osteosarcoma cells”. Cortizo MS,
Allesandini JL, Etcheverry SB, Cortizo AM. J
Biomater Sci Polymer Edn 12, 945-960, 2001.
A delivery system for vanadium was developed
using poly(beta-propiolactone) (PbetaPL) films. The release kinetics of a
complex of vanadium (IV) with aspirin (VOAspi) was evaluated with films
prepared from polymers of different molecular weights, as well as with variable
drug load. A sustained release of vanadium over 7 days was achieved. The drug
release kinetics depends on contributions from two factors: (a) diffusion of
the drug; and (b) erosion of the PbetaPL film. The experimental data at an
early stage of release were fitted with a diffusion model, which allowed
determination of the diffusion coefficient of the drug. VOAspi does not show
strong interaction with the polymer, as demonstrated by the low apparent
partition coefficient (approximately 10(-2)). UMR106 osteosarcoma cells were
used as a model to evaluate the anticarcinogenic effects of the VOAspi released
from the PbetaPPL film. VOAspi-PbetaPL film inhibited cell proliferation in a
dose-response manner and induced formation of approximately half of the
thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), an index of lipid
peroxidation. compared to that with free VOAspi in solution. The unloaded
PbetaPL film did not generate cytotoxicity, as evaluated by cell growth and
TBARS. Thus, the polymer-embedded VOAspi retained the antiproliferative effects
showing lower cytotoxicity than the free drug. Results with VOAspi-PbetaPL
films suggest that this delivery system may have promising biomedical and
therapeutic applications.
7.1.4. “A simple method to assess the oxidative
susceptibility of low density lipoproteins”. Scoccia
AE, Molinuevo MS, McCarthy AD, Cortizo AM. BMC Clinical Pathol 1, 1, 2001. http://www.biomedcentral.com/1472-6890/1/1
BACKGROUND: Oxidative modification of low
density lipoproteins (LDL) is recognized as one of the major processes involved
in atherogenesis. The in vitro standardized measurement of LDL oxidative
susceptibility could thus be of clinical significance. The aim of the present
study was to establish a method which would allow the evaluation of oxidative
susceptibility of LDL in the general clinical laboratory. RESULTS: LDL was
isolated from human plasma by selective precipitation with amphipathic
polymers. The ability of LDL to form peroxides was assessed by measuring
thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) after incubation with Cu2+ and
H2O2. Reaction kinetics showed a three-phase pattern (latency, propagation and
decomposition phases) which allowed us to select 150 min as the time point to stop
the incubation by cooling and EDTA addition. The mixture Cu2+/H2O2 yielded more
lipoperoxides than each one on its own at the same time end-point. Induced
peroxidation was measured in normal subjects and in type 2 diabetic patients.
In the control group, results were 21.7 +/- 1.5 nmol MDA/mg LDL protein, while
in the diabetic group results were significantly increased (39.0 +/- 3.0 nmol
MDA/mg LDL protein; p < 0.001). CONCLUSION: a simple and useful method is
presented for the routine determination of LDL susceptibility to peroxidation
in a clinical laboratory.
7.1.5. “Non-enzymatic glycosylation of a type I collagen
matrix: effects on osteoblastic development and oxidative stress”. McCarthy A,
Etcheverry S, Bruzzone L, Lettieri G, Barrio D, Cortizo AM. BMC Cell Biol 2, 16, 2001. http://www.biomedcentral.com/14721-2121/2/16.
BACKGROUND: The tissue accumulation of
protein-bound advanced glycation endproducts (AGE) may be involved in the
etiology of diabetic chronic complications, including osteopenia. The aim of
this study was to investigate the effect of an AGE-modified type I collagen
substratum on the adhesion, spreading, proliferation and differentiation of rat
osteosarcoma UMR106 and mouse non-transformed MC3T3E1 osteoblastic cells. We
also studied the role of reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide
synthase (NOS) expression on these AGE-collagen mediated effects. RESULTS:
AGE-collagen decreased the adhesion of UMR106 cells, but had no effect on the
attachment of MC3T3E1 cells. In the UMR106 cell line, AGE-collagen also
inhibited cellular proliferation, spreading and alkaline phosphatase (ALP)
activity. In preosteoblastic MC3T3E1 cells (24-hour culture), proliferation and
spreading were significantly increased by AGE-collagen. After one week of
culture (differentiated MC3T3E1 osteoblasts) AGE-collagen inhibited ALP
activity, but had no effect on cell number. In mineralizing MC3T3E1 cells
(3-week culture) AGE-collagen induced a decrease in the number of surviving
cells and of extracellular nodules of mineralization, without modifying their
ALP activity. Intracellular ROS production, measured after a 48-hour culture,
was decreased by AGE-collagen in MC3T3E1 cells, but was increased by
AGE-collagen in UMR106 cells. After a 24-hour culture, AGE-collagen increased
the expression of endothelial and inducible NOS, in both osteoblastic cell
lines. CONCLUSIONS: These results suggest that the accumulation of AGE on bone
extracellular matrix could regulate the proliferation and differentiation of
osteoblastic cells. These effects appear to depend on the stage of osteoblastic
development, and possibly involve the modulation of NOS expression and
intracellular ROS pathways.
7.1.6. “Biochemical properties of a vanadyl(IV)aspirin
complex on bone cells lines in culture”. Etcheverry SB, Williams PAM, Sálice
VC, Barrio DA, Ferrer EG, Cortizo AM. BioMetals
15, 37-49, 2002.
A recently synthesized vanadyl(IV) complex with
aspirin [VO(aspirin)ClH2O]2, has been thoroughly investigated by
physicochemical techniques. In order to support the proposed structure,
stoichiometry and the coordination sphere of the vanadium center, some studies
such as elemental analysis, electronic (diffuse reflectance) and vibrational
(infrared) spectroscopies, magnetic susceptibility, as well as the thermal
behavior, were carried out. The bioactivity of the vanadium complex (VOAspi)
was evaluated on two osteoblast-like cell lines in culture, being its cytotoxic
effects stronger than the vanadyl cation as assessed by morphological changes
and lipid peroxidation. These effects may be partially explained through the
induction of the expression of Erks (Extracellular signal-regulated kinases)
and the inhibition of the PTPases (Phosphotyrosine phosphatases) present in the
cellular extracts.
7.1.7. “Three new vanadyl(IV) complexes with non steroidal
anti-inflamatory drugs (Ibuprofen, Naproxen and Tolmetin). Bioactivity on
osteoblast-like cells in culture ”. Etcheverry SB, Barrio DA, Cortizo AM, Williams PAM. J. Inorg Biochem. 88, 94-100, 2002.
The synthesis and spectral and magnetic
characterization of VO(2+) complexes with Ibuprofen
(2-(4-isobutylphenyl)propionic acid), Naproxen
(6-methoxy-alpha-methyl-2-naphthalene acetic acid) and Tolmetin
(1-methyl-5-(4-methylbenzoyl)-1H-pyrrole-2-acetic acid) were studied. The
complexes [VO(Ibu)(2)] x 5CH(3)OH, [VO(Nap)(2)] x 5CH(3)OH and [VO(Tol)(2)]
were obtained from methanolic solutions under nitrogen atmosphere. The
biological activities of these complexes on the proliferation of two
osteoblast-like cells in culture (MC3T3E1 and UMR106) were compared with that
of the vanadyl(IV) cation. The complexes exhibited different effects depending
on the concentration and the cellular type, while no effect was observed for
their parent drugs.
7.1.8. “In vitro evaluation of biocompatibility of dental
metal materials on osteoblast cells in culture”. Cortizo
MC, Fernández L. de Mele M, Cortizo AM. En: “Metal Ions in Biology and
Medicine”. John Libbey Eurotext (Paris), vol 7, 2002.
The aim of this work was to evaluate the
biocompatibility of the metal components of dental materials on the growth of
osteoblast UMR106 cells in culture. Cells were exposed to Ag, Cu, Au, Pt, Pd
and Ni/Ti alloy samples for different incubation periods. Number of surviving
cells, mitotic index, cell morphology, and the expression of alkaline
phosphatase activity as a marker of osteoblastic phenotype were investigated as
parameters of biocompatibility. The metal ion content of the culture media was
analyzed using atomic spectrophotometry. Cu and Ag were the more cytotoxic
elements, while Au, Pd, Pt and the Ni/Ti alloy were biocompatible in the
osteoblastic culture. Cu and Ag induced strong morphological changes in the
UMR106, after 48 hours, only a few cell survived (<5%). These results
correlated with the release of metal ions in the media. In conclusion, our
study showed that the UMR106 cell culture system appears suitable for
evaluating the biocompatibility of metallic dental materials.
7.1.9. “Two new vanadyl(IV) complexes with potential
antineoplastic effect on osteoblasts in culture”. Etcheverry
SB, Barrio DA, Molinuevo MS, Cortizo AM. En: “Metal Ions in Biology and
Medicine”. John Libbey Eurotext (Paris), vol 7, John Libbey Eurotext (Paris),
vol 7, 2002.
Vanadium compounds have
been shown to possess pronounced antineoplastic activity both in vivo and in
vitro. As part of a project devoted to the development of new vanadium
derivatives with potential therapeutical applications, two vanadyl(IV)
complexes, one with glucose (GluVO) and the other with naproxen, an
antiínflamatory drug (NapVO) were synthesized and thoroughly tested on
osteoblasts in culture. Rat osteosarcoma (UMR106) and mouse calvaria
(MC3T3E1)-derived cells were incubated with different concentrations of GluVO and
NapVO. Both compounds inhibited cell proliferation (crystal violet bioassay)
with higher potency on UMR106 tumoral cells than on the non-transformed
osteoblasts. GluVO behaved as a more potent inhibitory agent than NapVO. The
differentation of MC3T3E1 cells (alkaline phosphatase activity) was not
significantly affected by these vanadium derivatives. On the contrary, both
vanadium compounds inhibited UMR106 differentiation with similar potency, in a
dose response manner. In addition, both compounds caused morphological
alterations and lipid peroxidation (thiobarbituric reactive substances, TBARS).
The levels of TBARS increased in a manner dependent on the concentration of
vanadium. Both vanadyl(IV) complexes strongly enhanced the phosphorylation of
external regulated kinases (P-Erks). In conclusion, NapVO and GluVO caused
osteoblast cytotoxicity and morphological alterations with stronger effects on
tumoral than on non-transformed osteoblast-like cells, being potentially useful
compounds for antitumoral therapy.
7.1.10. “Synthesis, characterization and bioacitivy of
polyoxometalates on osteoblasts in culture”. Botto IL, Barrio DA, Eguzquiza MG, Cabello CJ, Cortizo AM, Etcheverry SB. En: “Metal Ions
in Biology and Medicine”. John Libbey Eurotext (Paris), vol 7, 2002.
Heteropoly- and isopolyoxometalates of V, Mo
and W, represent a class of polyanionic compounds with a variety of important
biological activities such as the inhibition of specific enzymes, antiviral and
antitumoral. The K salt of the [(PW9O34)2Co4(H2O)2]10-
anion (I) has been obtained in aqueous solution from the precursor, Na8HPW9O34.24H2O
(II), and CoCl2 in excess of KCl. Phase (I) and (II) were
characterized by different techniques such as X ray diffraction (XRD),
Vibrational spectroscopy (FTIR-Raman( and diffuse reflectance spectroscopy
(DRS), scanning electron microscopy (SEM-EDAX) and thermal studies. Phase (I)
is structurally related to the condensation of two fragments of (II) by a Co
tetranuclear cluster in a sandwich type configuration. The biological activity
on cell proliferation and morphological transformations, were investigated on
rat osteosarcoma (UMR106) and mouse calvaria (MC3T3E1)-osteoblast-like cells in
culture. Compound (II) did not show any effect on tumoral UMR106 proliferation
while it induced the proliferation of MC3T3E1 cell in a bell like shape. On the
contrary, phase (I) caused a strong inhibition on the UMR106 proliferation in a
dose response manner. The latter observation correlated with the marked
morphological changes caused by this compound on tumoral cells. In conclusion,
compound (II) promoted the proliferation of non-transformed osteoblasts without
any alteration of their morphology. This compound did not affect tumoral
osteoblasts. On the contrary, phase (I) strongly inhibited tumoral osteoblast
proliferation, inducing important morphological alterations. Hence, this
compound is interesting from a pharmaceutical point of view for its potential
use as an antitumoral drug.
7.2 TRABAJOS
EN PRENSA Y/O ACEPTADOS PARA SU PUBLICACIÓN. Debe hacer referencia
exclusivamente a aquelloas trabajospublicaciones
en loas
que haya hecho explícita mención de su calidad de Investigador de la CIC (Ver
instructivo para la publicación de trabajos, comunicaciones, tesis, etc.). Todoa
trabajopublicación
donde no figure dicha mención no debe ser adjuntadoa
porque no será tomadoa en
consideración. A cada trabajo, asignarle un número e
Iindicar el
nombre de los autores de cada trabajo en el mismo orden en que figurarán en la
publicación y el
lugar donde será publicado. A continuación, transcribir el resumen (abstract)
tal como aparecerá en la publicación. La versión completa de cada trabajo se presentará en papel, por
separado, juntamente con la constancia de aceptación. En cada
trabajo, el investigador deberá aclarar el tipo o grado de participación que le
cupo en el desarrollo del mismo y, para aquellos en los que considere que ha
hecho una contribución de importancia, deber á escribir una breve
justificación.
7.2.1. “Synthesis of a new vanadyl(IV) complex with trehalose
(TreVO). Insulin-mimetic activities in osteoblast-like cells in culture”. Barrio DA,
Williams PAM, Cortizo AM, Etcheverry SB. J Biol Inorg Chem. (aceptado dic 2002).
Vanadium compounds show interesting biological
and pharmacological properties. Some of them display insulin-mimetic effects
and others produce anti-tumoral actions. The bioactivity of vanadium is present
in inorganic species like vanadyl(IV) cation or vanadate(V) anion.
Nevertheless, the development of new vanadium derivatives with organic ligands,
which improve the beneficial actions and decrease the toxic effects, is of
great interest. On the other hand, the mechanisms involved in vanadium
bioactivity are still poorly understood. The new vanadium complex of vanadyl(IV) cation
with the disaccharide trehalose, (TreVO), Na6[VO(Tre)2].4H2O, here reported,
shows interesting insulin mimetic properties in two osteoblast cell lines, a
normal one (MC3T3E1) and a tumoral one (UMR106). The complex affected the
proliferation of both cell lines in different manners. On tumoral cells, TreVO
caused a weak stimulation of growth at 5mM but it inhibited cell proliferation in a
dose-response manner between 50-100mM. TreVO significantly inhibited UMR106
differentiation (15-25% of basal) in the range of 5-100mM. On normal osteoblasts, TreVO
behaved as a mitogen at 5-25mM. This
effect was blocked by different inhibitors of the MAPK pathway. At higher
concentrations (75-100mM), the
complex was a weak inhibitor of the MC3T3E1 proliferation. Besides, TreVO enhanced
glucose consumption by a mechanism independent of the PI3-Kinase activation. In
both cell lines, TreVO stimulated the ERK phosphorylation in a dose- and
time-dependent manner. Different inhibitors (PD98059, wortmannin, vitamins C
and E) partially decreased this effect which was totally inhibited by their
combination. These
results suggest that TreVO could be a potential candidate for therapeutic
treatments.
7.2.2.
“Advanced
glycation endproducts (AGEs) induce concerted changes in the osteoblastic
expression of their receptor RAGE and in the activation of extracellular
signal-regulated kinases (ERK)”. Ana M.
Cortizo, María G. Lettieri, Daniel A. Barrio, Natalia Mercer, Susana B.
Etcheverry, Antonio D. McCarthy. Mol Cell Biochem. Mol Cell Biochem (aceptado dic 2002).
An increase in the interaction between advanced
glycation end-products (AGEs) and their receptor RAGE is believed to contribute
to the pathogenesis of chronic complications of Diabetes mellitus, which can
include bone alterations such as osteopenia. We have recently found that
extracellular AGEs can directly regulate the growth and development of rat
osteosarcoma UMR106 cells, and of mouse calvaria-derived MC3T3E1 osteoblasts
throughout their successive developmental stages (proliferation, differentiation
and mineralisation), possibly by the recognition of AGEs moieties by specific
osteoblastic receptors which are present in both cell lines. In the present
study we examined the possible expression of RAGE by UMR106 and MC3T3E1
osteoblastic cells, by immunoblot analysis. We also investigated whether
short-, medium- or long-term exposure of osteoblasts to extracellular AGEs,
could modify their affinity constant and maximal binding for AGEs (by 125I-AGE-BSA
binding experiments), their expression of RAGE (by immunoblot analysis) and the
activation status of the osteoblastic ERK 1/2 signal transduction mechanism (by
immunoblot analysis for ERK and P-ERK). Our results show that both osteoblastic
cell lines express readily detectable levels of RAGE. Short-term exposure of
phenotypically mature osteoblastic UMR106 cells to AGEs decrease the cellular
density of AGE-binding sites while increasing the affinity of these sites for
AGEs. This culture condition also dose-dependently increased the expression of
RAGE and the activation of ERK. In proliferating MC3T3E1 pre-osteoblasts, 24-72
hour exposure to AGEs did not modify expression of RAGE, ERK activation or the
cellular density of AGE-binding sites. However, it did change the affinity of
these binding sites for AGEs, with both higher- and lower-affinity sites now
being apparent. Medium-term (one week) incubation of differentiated MC3T3E1
osteoblasts with AGEs, induced a simultaneous increase in RAGE expression and
in the relative amount of P-ERK. Mineralising MC3T3E1 cultures grown for three
weeks in the presence of extracellular AGEs showed a decrease both in RAGE and
P-ERK expression. These results indicate that, in phenotypically mature
osteoblastic cells, changes in ERK activation closely follow the AGEs-induced
regulation of RAGE expression. Thus, the AGEs-induced biological effects that
we have observed previously in osteoblasts, could be mediated by RAGE in the
later stages of development, and mediated by other AGE receptors in the earlier
pre-osteoblastic stage.
7.2.3.
“Determinación de ácido siálico sobre lipoproteínas de baja
densidad aisladas por precipitación selectiva. Propuesta de índices de
composición”. Scoccia AE,
Molinuevo MS, Cortizo AM. Acta Bioq Clin Latinoam (aceptado dic 2002).
El objetivo de este estudio fue
optimizar la determinación de ácido siálico en LDL aislada por precipitación
selectiva y establecer relaciones entre componentes que puedan ser indicadores
de aterogenicidad. Se empleó polivinilsulfato disuelto en PEG como reactivo
precipitante, se ajustaron las condiciones de los lavados para garantizar la
ausencia de otras proteínas del suero y se solubilizó la LDL en 5% de NaCl. Se
determinó apoB, colesterol, proteínas y se optimizó la cuantificación de ácido
siálico según el método de Warren modificado por Sobenin y col. Se realizó la
evaluación del método analítico adaptado en cuanto a precisión intra- e
inter-ensayos (CV 5,8 y 9 % respectivamente), linealidad (hasta 14 nmol de
sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico / 100 ml de suero); efecto de los
lavados; especificidad; ausencia de interferencia de blancos de reactivo
precipitante; ensayo de recuperación (entre 88 y 120%). Los resultados
obtenidos sobre 30 muestras de personas normolipémicas de ambos sexos (edades
entre 30 y 65 años) expresados como media ± SEM fueron: Colesterol
3,8 ±
0,2 mmol/l, ácido siálico 34,7 ± 2,7 mmol/l, ApoB 1,27 ± 0,09 mmol/l,
proteínas 1,57 ±
0,08 g/l. Indices de composición: ácido siálico / colesterol: 9,24 ±
0,48, ácido siálico / apoB 34,4 ± 3 mol/mol y ácido siálico / proteína 39,6 ± 1,31
mmol/g.
Los índices de composición propuestos podrían ser usados como posibles
indicadores de aterogenicidad, así como en la evaluación clínica de
tratamientos específicos.
7.3 TRABAJOS
ENVIADOS Y AUN NO ACEPTADOS PARA SU PUBLICACION. Incluir un resumen de no máas
de 200 palabras de cada trabajo, indicando el lugar al que han sido enviados.
Adjuntar copia de los manuscritos.
7.3.1. “Antitumoral
properties of two new vanadyl(IV) complexes on osteoblasts in culture. Role of
apoptosis and oxidative stress” María
S. Molinuevo MS, Barrio DA, Cortizo AM, Etcheverry SB. Cancer Chemother. Teraph.
El objetivo de este
trabajo fue estudiar el efecto de dos nuevos complejos de vanadilo(IV) (uno con
glucose, GluVO y otro con naproxeno, NapVO) sobre células de un osteosarcoma.
Se analizó la proliferación celular y la diferenciación en el osteosarcoma y
una línea no transformada (MC3T3E1).También se estudiaron las alteraciones
morfológicas, la peroxidación lipídica (producción de TBARS), la apoptosis
celular y la activación de kinasas reguladas extracelularmente (Erk). Los
complejos de vanadio causaron alteraciones morfológicas e inhibieron
fuertemente la proliferación y diferenciación del osteosarcoma. Por el
contrario, estos derivados de vanadio tuvieron poco efecto sobre las células
MC3T3E1. En la línea tumoral se observó un incremento en la producción de
TBARS, apoptosis y activación de Erk en respuesta a los compuestos de vanadio.
El inhibidor de la fosforilación de Erk, PD98059 no bloqueo la acción
antitumoral de los compuestos de vanadio, sin embargo estas acciones fueron
suprimidas por las vitaminas C y E). En conclusión, GluVO y NapVO ejercen un
efecto antitumoral sobre las células de osteosarcoma UMR106, inhibiendo la
proliferación y diferenciación. Mientras que la cascada de Erk no parece estar
relacionada con la bioactividad, la acción de ambos derivados de vanadio podría
ocurrir a través de la apoptosis y el estrés oxidativo.
7.3.2.
“Metallic dental material biocompatibility in
osteoblast-like cells: correlation with metal ions release” Cortizo MC, Fernandez L de Mele M, Cortizo AM. Dental Mater.
El objetivo de este
estudio fue evaluar la biocompatibilidad de los componentes metálicos más
relevantes de aleaciones dentales sobre osteoblastos en cultivo. También se
investigó la influencia de proteínas e iones sobre las propiedades de
disolución de los metales. Los elementos nobles (Au, Pt, Pd) y la aleación de
Ni/Ti fueron biocompatibles con los osteoblastos. El Cu y la Ag fueron los
elementos más citotóxicos, siendo los efectos correlacionados con los niveles
de iones detectados en el medio de cultivo (espectroscopia de absorción
atómica). Los datos sugieren que el mecanismo por el cual los metales inducen
muerte celular es por arresto de la mitosis, inducción de fenómenos apoptóticos
tempranos y finalmente por procesos de necrosis celular. Los experimentos
electroquímicos muestran que la disolución de Cu y Ag en medio salino es
gobernada principalmente por la concentración de cloruros. El suero del medio
de cultivo afecta fuertemente estos procesos incrementando la velocidad de
disolución de los metales. Este estudio demuestra la importancia de conocer la
influencia de la composición de los elementos de los materiales dentales, su
biocompatibilidad en un sistema in vitro bien definido, y los mecanismos de
corrosión de los metales, como ocurriría in vivo.
7.4 TRABAJOS
TERMINADOS Y AUN NO ENVIADOS PARA SU PUBLICACION. IIncluir
un resumen de no máas
de 200 palabras de cada trabajo.
7.5 COMUNICACIONES.
Incluir úunicamente
un listado y acompañar copia en papel de cada una. (No consignar los trabajos
anotados en los subtítulos anteriores).
7.5.1.
“Síntesis, caracterización y bioactividad de tres nuevos
complejos de vanadilo(IV) con drogas antiinflamatorias”. MS Molinuevo, AM Cortizo, SB Etcheverry, PAM Williams. XII Congreso Argentino de Fisicoquímica. San Martín de los
Andes, 23-27 abril, 2001.
7.5.2. “Advanced glycation end products on extracellular
matrix: Effects on growth and oxidative stress in osteoblast cultures”. Cortizo AM, McCarthy AD, Bruzzone L, Etcheverry SB. 61st
Sesión Científica de la Sociedad Americana de Diabetes. Filadelfia, USA, 22-26
junio, 2001. Diabetes 50 Supp 2, pg A150, 2001.
7.5.3.
“Oxidative
stress-induced by a vanadium(IV) complex with naproxen in osteoblast-like cells
in culture”. Molinuevo MS, Barrio
DA, Etcheverry SB, Cortizo AM. International workshop molecular biology of stress
responses. Mendoza, 10-13
octubre, 2001.
7.5.4.
“Farmacología de compuestos de vanadio(IV): acción
antitumoral de un derivado con naproxeno”. Molinuevo
MS, Barrio DA, Cortizo AM, Etcheverry SB. Primeras Jornadas de Educación
Farmacéutica en el nuevo milenio. La Plata, 6-8 noviembre, 2001. (sin
abstract).
7.5.5.
“Efectos de complejos de vanadilo con mono y disacáridos
sobre osteoblastos en cultivo”. Barrio
DA, Etcheverry SB, Cortizo AM. 6° Congreso Nacional Bioquímico. San Carlos de Bariloche,
14-17 noviembre, 2001.
7.5.6.
“Determinación de ácido siálico en lipoproteínas de baja
densidad y en orina de pacientes diabéticos tipo 2”. Cortizo AM, Heffes D, Castilla I, Scoccia AE, Molinuevo MS.
6°
Congreso Nacional Bioquímico. San Carlos de Bariloche, 14-17 noviembre, 2001.
7.5.7. “Antitumoral activities of a vanadium(IV) complex with
naproxen in osteoblast-like cells”. Barrio
DA, Molinuevo MS, Cortizo AM, Etcheverry SB. XXXVII Annual Meeting of the
Argentine Society for Biochemistry and Molecular biology research (SAIB). Villa Carlos Paz, Córdoba, 20-23 noviembre 2001. Biocell 25(Suppl
II): 43, 2001.
7.5.8.
“Vanadyl(IV)-saccharide
complexes: Bioactivity on proliferation and differentaiton. Putative mechanism
of action”. Barrio DA, Williams PAM, Cortizo AM, Etcheverry SB. The Third
International Symposium on Chemistry and Biological chemistry of vanadium. Osaka, Japon, 26-29 noviembre, 2001.
7.5.9. “In vitro evaluation of biocompatibility of dental
metal materials on osteoblast cells in culture”. Cortizo MC, Fernández L. de Mele M,
Cortizo AM. 7th International Symposium on Metal ions in biology and medicine.
Saint Petersburg, Rusia, 5-9 mayo, 2002.
7.5.10. “Two new vanadyl(IV) complexes with potential
antineoplastic effect on osteobalsts in culture”. Etcheverry SB, Barrio DA, Molinuevo
MS, Cortizo AM. 7th International Symposium on Metal ions in biology and
medicine. Saint Petersburg, Rusia, 5-9 mayo, 2002.
7.5.11. “Synthesis, characterization and bioacitivy of
polyoxometalates on osteoblasts in culture”. Botto IL,
Barrio DA, Eguzquiza MG, Cabello CJ, Cortizo AM, Etcheverry SB. 7th International
Symposium on Metal ions in biology and medicine. Saint Petersburg, Rusia, 5-9
mayo, 2002.
7.5.12. “Receptor for Advanced Glycation End Product (RAGE)
expression and Extracellular Signal-Regulated Kinases (ERK) activation in
osteoblasts are regulated by AGE”. Cortizo AM,
Lettieri MG, Barrio DA, Mercer N, Etcheverry SB, McCarthy AD. 62st
Sesión Científica de la Sociedad Americana de Diabetes. San Francisco, USA,
14-18 junio, 2002. Diabetes 51, Suppl
2, pgA623, Abs 2587-PO, 2002.
7.5.13. “Disolución de
Ag y Cu en presencia y ausencia de proteínas. Influencia sobre el
comportamiento de osteoblastos”.
Cortizo MC, Cortizo AM, Fernández Lorenzo de Mele M. XV Congreso de la Sociedad
Iberoamericana de Electroquímica. 8-13 septiembre, 2002. (sin abstract).
7.5.14. “Copper ions release in simulated biological fluids.
Evaluation of Koper citotoxicity”. Cortizo MC, Cortizo AM, Fernández Lorenzo de Mele M.
53rd Annual Meeting of the International Society of Electrochemistry. Düsseldorf, Germany. 15-20 septiembre, 2002.
7.5.15. “Efecto de los
productos de glicación avanzada (AGE) sobre la expresión de su receptor RAGE y
la activación de quinasas ERK”.
McCarthy AD, Lettieri MG, Barrio DA, Mercer N, Etcheverrt SB, Cortizo AM. XIII
Congreso de la Sociedad Argentina de Diabetes. Buenos Aires, 17-19 octubre,
2002.
7.5.16. “Propiedades
insulino miméticas de un nuevo complejo de vanadio(IV) con threhalosa”. Barrio DA, Williams PAM, Cortizo AM, Etcheverry SB XIII
Congreso de la Sociedad Argentina de Diabetes. Buenos Aires, 17-19 octubre,
2002.
7.5.17. “Biocompatibilidad
de iones metálicos en cultivos de osteoblastos”. Cortizo MC, Cortizo AM, Fernández Lorenzo de Mele M.
Sociedad Argentina de Investigación Odontológica. Proceedings of the XXXV International Congress for Dental Research Buenos Aires, 8,9 noviembre, 2002.
7.5.18. “Expresión de
Galectina-3 en osteoblastos en cultivo: regulación por productos de glicación
avanzada”. Mercer N, Vasta G,
Ahmed H, Lettieri G, Etcheverry S, Cortizo A. XLVII Reunión Científica de la
Sociedad Argentina de Investigación Clínica. L Reunión
Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología. Mar del Plata, 20-23
noviembre, 2002. Medicina 62,404, 2002.
7.5.19. “Efecto de la
glicación de una matriz extracelular sobre la adhesión de osteoblastos:
participación de integrinas”
McCarhty A, Uemura T, Etcheverry S, Cortizo A. XLVII Reunión Científica de la
Sociedad Argentina de Investigación Clínica. L Reunión Científica de la
Sociedad Argentina de Inmunología. Mar del Plata, 20-23 noviembre, 2002. Medicina 62,403,
2002.
7.5.20. “Efectos
insulino miméticos de Na6[VO(Tre)2].4H2O en
osteoblastos en cultivo. Estudio de las vias de transducción de señales” Barrio D, Cortizo A, Etcheverry S. XLVII Reunión Científica
de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica. L
Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología. Mar del
Plata, 20-23 noviembre, 2002. Medicina
62,456, 2002.
7.5.21.
“Mecanismo de acción antitumoral de complejos de vanadio” Molinuevo M, Barrio D, Cortizo A, Etcheverry S. XLVII
Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica. L Reunión Científica de la Sociedad Argentina de
Inmunología. Mar del Plata, 20-23 noviembre, 2002. Medicina 62,424,
2002.
7.6 INFORMES
Y MEMORIAS TECNICAS. Incluir un listado y acompañar copia en papel de cada uno
o referencia de la labor y del lugar de consulta cuando corresponda.
- TRABAJOS DE DESARROLLO DE
TECNOLOGÍAS.
8.1 DESARROLLOS
TECNOLÓGICOS. Describir la naturaleza
de la innovación o mejora alcanzada, si se trata de una innovación a nivel
regional, nacional o internacional, con
qué financiamiento se ha realizado, su utilización potencial o actual por parte
de empresas u otras entidades, incidencia en el mercado y niveles de
facturación del respectivo producto o servicio y toda otra información
conducente a demostrar la relevancia de la tecnología desarrollada.
8.1.1. Desarrollo
de un método de liberación controlada de drogas. Este método se basa en un
film de poly-b propiolactona (PbPL)
que contiene embebido un compuesto de vanadio con aspirina (VOAspi). Este
sistema permite la liberación controlada de la droga, la cual conserva sus
propiedades anticarcinogénicas en un modelo de osteosacoma de rata en cultivo y
menores efectos citotóxicos que el VOAspi libre. El film solo (sin VOAspi) no
presentó efectos tóxicos per se en el modelo empleado, sugiriendo una
buena biocompatilidad. Este sistema polimérico de PbPL
, de importancia en la industria farmacéutica, podría ser potencialmente útil
en la aplicación tópica de ciertas drogas usadas en la quimioterapia del
cáncer. Este proyecto fue financiado por la Agencia, CONICET, CICPBA y UNLP.
8.1.2. Desarrollo
de compuestos de vanadio(IV) con propiedades insulinosimiles o antitumorales.
Se sintetizaron, caracterizaron y estudiaron las propiedades insulinomiméticas
o antitumorales de diversos complejos de vanadio. Algunos de ellos los
complejos de vanadio con glucosa y naproxenos muestras efectos
antiproliferativos sobre un osteosarcoma, con minimos efectos sobre los
osteoblastos no tumorales en cultivo. Otro grupo de compuestos se comportan
como insulinosimiles , por ej el complejo con trealosa, que estimula el consumo
de glucosa en células en cultivo. Estos compuesto son potencialmente útiles
como agentes antitumorales o podrían usarse como hipoglucemiantes orales en el
tratamiento de la diabetes mellitus. Se realizan actualmente estudios en
animales de experimentación en colaboración con grupos del exterior. Este
proyecto fue financiado por la Agencia, CONICET, CICPBA y UNLP.
8.2 PATENTES
O EQUIVALENTES. Indicar los datos del
registro, si han sido vendidos o licenciados los derechos y todo otro dato que
permita evaluar su relevancia.
8.3 OTRAS
ACTIVIDADES TECNOLÓGICAS CUYOS RESULTADOS NO SEAN PUBLICABLES (desarrollo de equipamientos, montajes de
laboratorios, etc.).
8.4 Sugiera
nombres (e informe las direcciones) de las personas de la actividad privada y/o
pública que conocen su trabajo y que pueden opinar sobre la relevancia y el
impacto económico y/o social de la/s tecnología/s desarrollada/s.
- SERVICIOS TECNOLÓGICOS. Indicar qué tipo de servicios ha
realizado, el grado de complejidad de los mismos, qué porcentaje
aproximado de su tiempo le demandan y los montos de facturación.
- PUBLICACIONES Y DESARROLLOS EN:
10.1 DOCENCIA
10.2 DIVULGACIÓN
11. DIRECCION DE BECARIOS Y/O INVESTIGADORES. Indicar
nombres de los dirigidos, Instituciones de dependencia, temas de investigación
y períodos.
11.1. Antonio D. McCarthy,
Bioquímico. Ayudante diplomado - Semidedicación. Categoría “IV” del Programa de
Incentivos del Ministerio de Educación. Cátedra de Bioquímica Patológica,
Facultad de Ciencias Exactas, UNLP. Abril 1994 - actual. Tesista: aprobada el 15 de
diciembre 2001. calificación: 10. (Se adjunta copia de la carátula).
Tema: Regulación de la proliferación celular por productos avanzados de
glicación (PGA) en osteoblastos en cultivo. Co-dirección con la Prof. Dra. S.B.
Etcheverry.
11.2. Daniel A. Barrio,
Farmacéutico y Licenciado en Ciencias Farmacéuticas, agosto 2000. Becario de
Estudio de la CICPBA. 1/4/2001 – 31/3/2003. Beca de perfeccionamiento de la
CICPBA 1/4/2003 – actual. Tema: Farmacoquímica de compuestos de vanadio.
Síntesis, caracterización, y efectos biológicos sobre células en cultivo.
Tesista: inscripto en la Carrera
del Doctorado del la Facultad de Ciencias Exactas 20/4/2001.
Tema: Diabetes mellitus: efectos insulinomiméticos de
compuestos de vanadio en células óseas. Co-dirección con la Prof. Dra. S.B.
Etcheverry.
9.3. Natalia Mercer.
Estudiantes del último año de la Carrera de Bioquímica. Colaboración ad-honorem
en los proyectos de investigación en la Cátedra de Bioquímica Patológica,
Facultad de Ciencias Exactas, UNLP. Marzo 1998 – diciembre 1999.
Tesista: inscripta en la Carrera
del Doctorado del la Facultad de Ciencias Exactas 31/10/2001.
Tema: Efectos insulinomiméticos de compuestos de vanadio en células en
cultivo. Co-dirección con la Prof. Dra. S.B. Etcheverry.
Bioquímica. Incorporada a través
de la Beca “Ramón Carrillo – Arturo Oñativia 2000” del Ministerio de Salud de
la Nación. Cátedra de Bioquímica Patológica, Facultad de Ciencias Exactas,
UNLP. Noviembre 2000 – Octubre 2001.
Tema: Efectos de los productos de glicación avanzada sobre el crecimiento
y diferenciación ósea.
9.6. María Silvina Molinuevo.
Estudiante del último año de la Carrera de Farmacia y Licenciado en Ciencias
Farmacéuticas. Colaboración ad-honorem en los proyectos de investigación en la
Cátedra de Bioquímica Patológica, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP.
Septiembre 1998 – septiembre 2000. Beca de Experiencia Laboral, UNLP. Cátedras
de Bioquímica Patológica, Bromatología e Inmunología, Facultad de Ciencias
Exactas, UNLP. Octubre 2000 – actual.
Becaria del Colegio de
Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aires. Desde marzo – agosto 2002 y
septiembre 2002 – agosto 2003.
Tesista: inscripta en la Carrera
del Doctorado del la Facultad de Ciencias Exactas 31/10/2001.
Tema: Efectos insulinomiméticos de diversos compuestos de vanadio sobre
células en cultivo. Rol de las especies de oxígeno reactivas. Co-dirección con
la Prof. Dra. S.B. Etcheverry.
También participa con la Dra
Scoccia en el desarrollo de nuevas técnicas de aplicación en el laboratorio de
análisis clínico, para uso como marcadores de riesgo aterogénico y complicaciones
crónicas de la diabetes.
12. DIRECCION DE TESIS. Indicar nombres de los dirigidos y
temas desarrollados y aclarar si las tesis son de maestría o de doctorado y si
están en ejecución o han sido defendidas; en este último caso citar fecha.
12.1.
Antonio D. McCarthy (ver 9.1.). Inscripto en la Carrera del
Doctorado de la Facultad de Ciencias Exactas. Tesis aprobada el 15 de diciembre
2001.
12.2.
Bioquímica Claudia B. Hereñu. Inscripta en la Carrera del Doctorado de la
Facultad de Ciencias Exactas (30/3/2000). Exp.700-54941/99. Director, Dr.
Rodolfo Goya; codirectores, Dr. Omar Rimoldi y Dra. Ana M Cortizo. Tesis en
ejecución.
12.3.
Farmacéutico
y Licenciado en Ciencias Farmacéuticas Daniel A. Barrio. Inscripto en la Carrera del
Doctorado de la Facultad de Ciencias Exactas (20/4/2001). Exp. 056905/000.
Director, Dra Susana B. Etcheverry, codirector, Dra Ana M. Cortizo. Título: Farmacología de compuestos de vanadio:
Efectos sobre células en cultivo.
Tesis en ejecución.
12.4.
Farmacéutica
y Licenciada en Ciencias Farmacéuticas María Silvina Molinuevo.
Inscripta en la Carrera del Doctorado de la Facultad de Ciencias Exactas
(31/10/2001). Exp. 057779/000. Director, Dra Susana B. Etcheverry, codirector,
Dra Ana M. Cortizo. Título: Mecanismos
citotóxicos de compuestos de vanadio en osteoblastos en cultivo. Tesis en ejecución.
12.5.
Bioquímica
Natalia Mercer. Inscripta en la Carrera del Doctorado de la Facultad de
Ciencias Exactas (31/10/2001). Exp. 057778/000. Director, Dra Ana M: Cortizo,
codirector, Dra Susana B. Etcheverry. Título: Efectos de la glicación de diferentes matrices extracelulares sobre el
desarrollo de células óseas en cultivo. Tesis en ejecución.
13. PARTICIPACION EN REUNIONES CIENTIFICAS. Indicar la
denominación, lugar y fecha de realización, tipo de participación que le cupo, títulos de
los trabajos o comunicaciones presentadas y autores de los mismos.
Ver
item 7.5
14. CURSOS DE PERFECCIONAMIENTO, VIAJES DE ESTUDIO, ETC.
Señalar características del curso o motivo del viaje, período, instituciones
visitadas, etc.
Científico Visitante. Estadía de trabajo en el laboratorio del Dr.
Gerardo Vasta, Center of Marine Biotechnology, University of Maryland
Biotechnolgy Institute. Por invitación del Dr Y Zohar, Director del Centro, (Se adjunta copia de la carta de invitación).
En el marco de un proyecto cooperativo en Galectinas en osteoblastos. 10
Enero – 10 abril 2002.
Durante este período se realizaron los estudios descriptos en el item
6.2.
15. SUBSIDIOS RECIBIDOS EN EL PERIODO. Indicar institución
otorgante, fines de los mismos y montos recibidos.
15.1.
Beca “Ramón Carrillo – Arturo Oñativia 2001”.
Ministerio de Salud de la Nación. Monto: 21000 $, noviembre 2001. Proyecto: Regulación
de la progresión osteoblástica por una matriz extracelular modificada con
productos de glicación avanzada (AGE): rol de diversos receptores celulares y
sus mecanismos de acción. Dra Ana M Cortizo.
15.2.
Subsidio de la Universidad Nacional de La Plata. Monto:
450 $, 430 $, Correspondiente a los subsidios automáticos 2000. Proyecto: Regulación de la proliferación
celular por productos avanzados de glicación. Dra Ana M Cortizo, - Dra Susana
B. Etcheverry. Otorgada en 2002.
15.3.
Subsidio de Proyectos de Extensión 2002 de la
Facultad de Ciencias Exactas. Monto: 1000 $. Proyecto: “Diabetes mellitus gestacional en la ciudad de La Plata; detección
precoz y establecimiento de factores de riesgo“. Dra Susana Etcheverry, Dr
Antonio D McCarhty y Dra Ana M Cortizo. Otorgado diciembre 2002.
16. DISTINCIONES O PREMIOS OBTENIDOS EN EL PERIODO.
Mención de
Calidad. 6°
Congreso Nacional Bioquímico. San Carlos de Bariloche, 14-17 noviembre, 2001. “Efectos de complejos de vanadilo con mono
y disacáridos sobre osteoblastos en cultivo”. Barrio DA, Etcheverry SB,
Cortizo AM.
17.
ACTUACION EN ORGANISMOS
DE PLANEAMIENTO, PROMOCION O EJECUCION CIENTIFICA Y TECNOLÓGICA. Indicar las
principales gestiones realizadas durante el período y porcentaje aproximado de
su tiempo que ha utilizado
17.1.
Miembro
de Jurados
Concursos
·
Concurso
en la Cátedra de Anatomía y Fisiología, para cubrir un cargo de Jefe de
Trabajos Prácticos DS. Integrante del concurso por el claustro de Profesores
como Titular. 20 de septiembre de 2001. Exp- 700-57074.
·
Concurso
en la Cátedra de Anatomía (Bioquímica), para cubrir un cargo de Ayudante Alumno
Rentado. Integrante del concurso por el claustro de Profesores como Titular. 9
de octubre de 2001. Exp- 700-56979.
·
Concurso
en la Cátedra de Anatomía, para cubrir un cargo de Jefe de Trabajos Prácticos
DS. Integrante del concurso por el claustro de Profesores como Titular. 9 de
octubre de 2001. Exp- 700-56870.
·
Concurso
en la Cátedra de Histología, para cubrir un cargo de Jefe de Trabajos Prácticos
DS. Integrante del concurso por el claustro de Profesores como Titular. 9 de
octubre de 2001. Exp- 700-56867.
Jurado de Tesis
·
Jurado de trabajo de
tesis doctoral: Médico Veterinario José Ignacio Aguirre. Facultad de Ciencias
Veterinarias, UNLP. 2002.
17.2. Proyectos
Acreditados en el Marco del Programa de Incentivos a Docentes-Investigadores
Codirector
- “Efectos
insulinomiméticos de diversos compuestos de vanadio sobre células en
cultivo”. Direcctor: Dra Etcheverry. Cátedra de Bioquímica Patológica,
Facultad de Ciencias Exactas, UNLP. 1/5/98-31/12/2001.
- “Farmacología
de compuestos de vanadio y sus efectos a nivel celular”. Direcctor: Dra
Etcheverry. Cátedra de Bioquímica Patológica, Facultad de Ciencias
Exactas, UNLP. 1/1/2002-31/12/2004.
Director
- “Regulación
de la proliferación celular por productos avanzados de glicación”. Cátedra
de Bioquímica Patológica, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP.
1/5/98-31/12/2001.
- “Efectos
de los productos de glicación avanzada sobre el crecimiento y desarrollo
óseo”. Cátedra de Bioquímica Patológica, Facultad de Ciencias Exactas,
UNLP. 1/1/2002-31/12/2004.
17.3.
Proyectos
colaborativos con grupos del exterior
- “Rol de
la formación de AGE sobre proteínas de matriz en la regulación del
crecimiento y desarrollo osteoblástico“. Dr Toshimasa Uemura, National Institute for
Advanced Interdisciplinary Research, 3D Tissue Engineering Group, Ibaraki,
Japón. 2000-actual.
- “Rol de
Galectina-3 como receptor de AGE sobre los efectos de AGE en el
crecimiento óseo“. Dr
Gerardo Vasta, Center of Marine Biotechnology, University of
Maryland Biotechnology Institute, Columbus Center, Baltimore, USA.
2001-actual.
17.4. Dirección de
institutos – programas – laboratorios – etc
- Creación
del Laboratorio de Investigaciones
básicas y aplicadas en enfermedades metabólicas hereditarias. Aprobado
por el Honorable Consejo Académico de la Facultad de Ciencias Exactas,
UNLP. Exp. 700-52010/98. Elevado al Consejo Superior de la Universidad
Nacional de La Plata.
17.5. Proyectos de
extensión 2002.
- “Diabetes
mellitus gestacional en la ciudad de La Plata; detección precoz y
establecimiento de factores de riesgo“. Responsables: Prof dra Susana B
Etcheverrry, Dra Ana M Cortizo, Dr Antonio D. McCarthy. Iniciado en
diciembre 2002, actualmente en curso.
18. TAREAS DOCENTES DESARROLLADAS EN EL PERIODO. Indicar
el porcentaje aproximado de su tiempo que le han demandado.
PRE-GRADO
18.1. Profesor Titular -
Dedicación Simple - Interino (por concurso)
Cátedra
de Bioquímica Patológica, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP.
Duración:
16/9/93 - 14/6/94.
Extensión a Semidedicación por el
Programa de Incentivos del Ministerio de Educación de la Nación. Categoría
Docente-Investigador “B”
Duración:
15/6/94 - 15/6/95.
Extensión a Dedicación Exclusiva por el
Programa de Incentivos del Ministerio de Educación de la Nación. Categoría
Docente-Investigador “B” (01/-4/1994). Categoría “2” (10/1998).
Duración:
15/6/95 – 31/10/99.
18.2.
Profesor Adjunto – Dedicación
Simple – Interino
(Exp. Nro.700-54690/1999)
Cátedra
de Bioquímica Patológica, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP.
Duración:
1/11/99 - actual.
Extensión a Dedicación Exclusiva en el Marco del Programa de Incentivos
Duración: 1/11/99 – actual.
19. OTROS ELEMENTOS DE JUICIO NO CONTEMPLADOS EN LOS
TITULOS ANTERIORES. Bajo este punto se
indicará todo lo que se considere de interés para la evaluación de la tarea
cumplida en el período.
19.1.
Miembro de la Asociación Banco Argentino de Células (ABAC), 2000,
2001.
19.2.
Miembro de la
American Diabetes Association, 2000 – 2001.
19.3.
Miembro de la
Sociedad Argentina de Investigación Clínica,
2001, 2002
19.4.
Arbitro en la
evaluación de informes de proyectos de incentivos de la Universidad Nacional de
Buenos Aires, 2001.
19.5.
Arbitro en la
evaluación de proyectos de investigación de la Agencia Nacional de Promoción
Científica y Tecnológica de la Argentina. Proyectos de Investigación Científica
y Tecnológica. Convocatoria PICT 2001-2001.
19.6.
Miembro titular del
Jurado en el Premio ²Federación Bioquímica 2001². Septiembre 2001.
19.7.
Miembro de la
Comisión Asesora de Hacienda del Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad
de Ciencias Exactas, UNLP. 2001.
19.8.
Miembro de la
Comisión Asesora de Enseñanza del Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad
de Ciencias Exactas, UNLP. 2002.
20. TITULO Y PLAN DE TRABAJO A REALIZAR EN EL PROXIMO
PERIODO. Desarrollar en no más de 3
páginas. Si corresponde, explicite la importancia de sus trabajos con relación
a los intereses de la Provincia
20.1. “Farmacología de compuestos de vanadio y sus efectos a nivel
celular”
Se
estudiarán los efectos de nuevos compuestos de vanadio, complejos con drogas
anti-inflamatorias así como con diversos azúcares, sobre el crecimiento y
desarrollo de osteoblastos en cultivo. En particular, sus acciones
insulinomiméticas y propiedades antitumorales.
Se investigará el efecto de
los compuestos de vanadio sobre los cambios morfológios de los osteoblastos y
las proteínas del citoesqueleto que podrían estar involucradas en dichos
cambios.
Se
analizará los mecanismos de transducción de señales de compuestos de vanadio
comprometidos en sus efectos biológicos. En particular se investigará la
presencia de MAPK fosforiladas en restos de tirosinas, usando anticuerpos
específicos para la isoforma fosforilada. También la producción de especies de
oxigeno reactivas, la lipoperoxidación y la inducción de apoptosis celular.
Se
estudiarán los mecanismos de interacción de diversos compuestos de vanadio con
membranas biológicas y sintéticas, así como los cambios en la composición
lipídica de las membranas, inducidas pos dichos compuestos.
20.2. “Efectos de los productos de glicación avanzada
sobre el crecimiento y desarrollo óseo”
Se
estudiará los efectos de la glicación
de proteínas de matriz extracelular tales como colágeno y fibronectina, sobre
la adhesión, proliferación y diferenciación de osteoblastos en diferentes
estadios de maduración.
Se
investigará la muerte celular por apoptosis o necrosis inducida por AGEs en
cultivos de osteoblastos crecidos sobre matrices con diferentes grados de
glicación.
Se ha establecido un proyecto
cooperativo con el Dr T. Uemura del Instituto Nacional de Investigación
Interdisciplinaria Avanzada, Ibaraki, Japón. En este proyecto se investigará la
interacción de integrinas de los osteoblastos cultivados sobre matrices de
proteinas glicadas o no, usando un péptido sintético de 13 aminoácidos, que
simula la secuencia conservada en la cadena b de las integrinas que interactúan
con las proteínas de matriz extracelular.
Por otro lado, se analizará la
presencia y regulación con el grado de diferenciación osteoblástica de
galectina-3 a nivel de la proteína y del mRNA. Para ello se utilizará la
técnica de Western blot y un anticuerpo anti gal-3 donado por el Dr Gerardo
Vasta, y RT-PCR semicuatitativo para determinar el mRNA de gal-3. Este trabajo
se realiza en el marco de un proyecto cooperativo con el Dr Vasta en el
Instituto de Biología Marina, Universidad de Maryland, Baltimore, USA
Prof. Dr. Ana M. Cortizo
Investigador Independiente