INFORME CIENTÍFICO-TECNOLÓGICO[1]
PERIODO: mayo 2001 - abril 2003
Legajo Nº:262109
- APELLIDO:
NATALUCCI
NOMBRES: Claudia Luisa
2.
TEMA
DE INVESTIGACIÓN: “ENZIMAS
PROTEOLITICAS DE PLANTAS SUPERIORES”.
3.
DATOS
RELATIVOS A INGRESO Y PROMOCIONES EN LA CARRERA
INGRESO: Categoría: Asistente Mes: febrero Año:1985
ACTUAL: Categoría: Adjunto (sin Director) Mes: enero Año: 1997
PROMOCIÓN PROPUESTA: Independiente (acta 1165/02 del
Directorio)
4.
INSTITUCION
DONDE DESARROLLA LA TAREA
Nombre: Laboratorio de Investigación de
Proteínas Vegetales (LIPROVE)
Dependencia: Depto. de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias Exactas, UNLP.
Dirección Calle: calles 47 y 115
Ciudad: La Plata Pcia: Buenos Aires Tel: (0221) 423-0121 int. 57
Dirección electrónica: liprove@biol.unlp.edu.ar
Cargos: Jefe de Trabajos Prácticos con
dedicación exclusiva, cumpliendo funciones de Profesor
5.
DIRECTOR
DE TRABAJOS. (En el
caso que corresponda)
Apellido y Nombres:
.....................................................................................................................
Dirección. Calle
............................................................................................................................
Ciudad:
................................................................... Pcia:
............................. Tel: .......................
Dirección electrónica:
...................................................................................................................
.......................................................
..................................................
Firma del Director (si corresponde) Firma del Investigador
Fecha..28...../..07....../.03.
6.
EXPOSICION
SINTETICA DE LA LABOR DESARROLLADA EN EL PERIODO.
Las actividades de laboratorio corresponden en su
mayoría a las que realizan los tesistas que se encuentran bajo mi dirección
(Items 6.1. a 6.4.), para quienes planifico los experimentos a realizar y con
quienes discuto los resultados obtenidos. En forma personal he realizado la
determinación de las constantes cinéticas de una enzima aislada por un colega
brasileño, con quien he iniciado un trabajo en colaboración (Item 6.5.).
Por otra parte en este período me he propuesto iniciar
la tarea de lograr un mejor posicionamiento de nuestro laboratorio entre
aquellos grupos de I+D que realizan una eficiente transferencia al medio
productivo, en particular PYMES de nuestra Provincia. En este sentido he
integrado el grupo de transferencia de la UVT de nuestra Facultad, participando
activamente en la confección de la “Carpeta de Alimentos” en la que hemos
presentado las capacidades que poseen diferentes grupos de nuestra Unidad
Académica con posibilidad cierta de transferencia a los diferentes tipos de
industrias vinculadas al sector alimentario. En el mismo sentido he realizado
el curso “Especialización en Gestión Tecnológica”, dictado por el
Ing. Oscar Galante (FONTAR) durante los meses de septiembre a noviembre de
2002. Además he participado en los talleres organizados por la Dirección de
Vinculación Tecnológica de la UNLP.
6.1.
Proteasas de Bromelia balansae (balansaína)
En el período informado he continuado con la dirección
de este tema, que corresponde a la etapa final del plan de tesis del Bioqco.
Marcelo Pardo. Se ha concluido la obtención de los perfiles polipeptídicos por
electoforesis (SDS-Tricina-PAGE y Urea-PAGE) de los diferentes hidrolizados
producidos empleando balansaína sobre caseínas bovinas en diferentes
condiciones. Para efectuar un correcto análisis de los perfiles hidrolíticos se
obtuvieron los respectivos densitogramas empleando el programa Scion Image. El
tesista se encuentra redactando el trabajo final, por lo que en estos momentos
las actividades que realizo corresponden a la corrección de los manuscritos de
su tesis.
6.2.
Proteasas de Asclepias fruticosa (asclepaína f)
En el período informado he iniciado la planificación y
dirección de esta línea de investigación, que corresponde a la Tesis Doctoral
de Bioqco. Sebastián Trejo. Los avances logrados son: recolección de látex;
obtención de las proteasas parcialmente purificadas por precipitación acetónica
fraccionada y caracterización de las mismas
(pH óptimo, estabilidad a la temperatura, al pH, a las sales). Se prosiguió con
la purificación por FPLC de la enzima, la caracterización de asclepaína
f purificada (PM, pI, perfil de pH, acción de inhibidores y activadores) y la determinación de la
secuencia N-terminal de la enzima. En base a este último resultado se determinó
el porcentaje de identidad con otras fitoproteasas. Actualmente se está
realizando la extracción de RNA total y el aislamiento de mRNAs para la
obtención del cDNA correspondiente a la proteasa.
6.3.
Proteasas de Plantas de la Flora Patagónica
Se trata del tema de Tesis Doctoral de la Bioqca.
Cynthia Sequeiros. El trabajo se encuentra en etapa intermedia de realización y
las tareas que he dirigido en este período son: recolección del látex de Philibertia gillesii, preparación de philibertaína g parcialmente purificada
por precipitación fraccionada, caracterización
de la preparación parcialmente purificada (pH
óptimo, estabilidad a la temperatura, al pH, a las sales), ensayos preliminares de hidrólisis de agua de
cola con la enzima obtenida y análisis electroforético de los péptidos
resultantes. Se ha procedido a la obtención de una fracción enzimática pura por
intercambio catiónico (FPLC), y se ha iniciado la caracterización de esta
fracción: PM, pI, perfil de pH.
6.4.
Proteasas de Syllibum marianum
En el período informado he dirigido esta línea, junto
a la Dra. Nora Priolo, la que corresponde a la Tesis Doctoral de la Bioqca.
Sandra Vairo Cavalli. Se ha procedido a la recolección del material vegetal, la
purificación parcial de las proteasas por cromatografía de exclusión molecular,
la caracterización de la preparación parcialmente purificada y el empleo de la
preparación enzimática para obtener hidrolizados parciales de caseínas bovina,
ovina y caprina, los que fueron analizados por electroforesis en geles de
poliacrilamida.
6.5.
Determinación de las constantes cinéticas de la enzima Simonasa
Es un trabajo en colaboración con el Dr. Carlos Salas
del Lab. de Biologia Molecular e Produtos Naturais, ICB, UFMG, Belo Horizonte,
Brasil. Se ha concluido la determinación por espectrofotometría de las
constantes para cinco sustratos sintéticos. Es un trabajo personal, en el que
colabora la Qca. Cecilia Cimino.
7. TRABAJOS DE INVESTIGACION REALIZADOS O PUBLICADOS EN
ESTE PERIODO.
7.1
PUBLICACIONES.. A continuación de cada
cita bibliográfica, transcribir el resumen (abstract) tal como aparece en el
trebajo. La copia en papel de cada publicación, se presentará por s
7.1.1. Pardo, M.F. and C.L. Natalucci (2002)
“Electrophoretic Analysis (Tricine SDS-PAGE) of Bovine Caseins” Acta
Farmacéutica Bonaerense 21: 57-60
Participación personal: Programación y
coordinación del trabajo. Discusión de los resultados y redacción junto al
tesista Marcelo Pardo. Dirección de los experimentos realizados por el Bqco. Marcelo Pardo.
7.1.2. Trejo, S.A., L.M.I López, C.V. Cimino, N.O.
Caffini, and C.L. Natalucci (2001) “Purification and Characterization of a new
plant endopeptidase isolated from the latex of Asclepias fruticosa L. (Asclepiadaceae)“.
Journal of Protein Chemistry 20: 445-453.
Participación personal: Programación y
coordinación del trabajo. Discusión de los resultados y redacción junto al
resto de los autores. Dirección de los experimentos que realizaran el
Bioquímico Sebastián Trejo y la Química Cecilia Cimino.
7.1.3. Pardo, M.F., L.M.I. López, N.O. Caffini and
C.L. Natalucci (2001) "Properties of a milk clotting protease isolated
from Fruits of Bromelia balansae Mez”. Biological Chemistry (Hoppe – Syler) 382: 871-874
Participación personal: Programación y
coordinación del trabajo con el Dr. Néstor Caffini. Discusión de los resultados
y redacción junto al resto de los autores. Dirección de los experimentos que
realizara el Tesista Marcelo Pardo.
7.1.4. Pardo, M.F., L.M.I. López, C.L. Natalucci, F.
Canals, F.X. Avilés and N.O. Caffini (2000) “Purification of Balansein I, a
plant protease from unripe fruits of
Bromelia balansae Mez (Bromeliaceae)". Journal of Agricultural and Food Chemistry 48: 3795-800.
Participación personal: Programación y
coordinación de la parte experimental. Discusión de los resultados y redacción
junto al resto de los autores. Dirección de los experimentos realizados por la
Dra. Laura López y el Tesista Marcelo Pardo.
7.1.5. López, L.M.I., C.
Sequeiros, S.A. Trejo, M.F. Pardo, N.O. Caffini and C.L. Natalucci (2001) "Comparison of Two
Cysteine Endopeptidases from Pseudananas macrodontes (Morr.) Harms (Bromeliaceae)", Biological
Chemistry (Hoppe – Syler) 382: 875-878
Participación personal: Programación y
coordinación de la parte experimental. Discusión de los resultados y redacción
junto al resto de los autores. Dirección de los experimentos realizados por la
Dra. Laura López y los Bioquímicos Marcelo Pardo, Cynthia Sequeiros y Sebastián
Trejo.
7.2
TRABAJOS
EN PRENSA Y/O ACEPTADOS PARA SU PUBLICACIÓN.
7.2.1. Sequeiros, C., L.M.I. López, N.O. Caffini and C.L. Natalucci “Proteolytic Activity in some Patagonian Plants from Argentina”. Fitoterapia (2003).
Participación personal: Programación y
coordinación del trabajo y dirección, junto a la Dra. Laura López, de los
experimentos realizados por la Tesista Cynthia Sequeiros. Discusión de los
resultados y redacción junto al resto de los autores.
7.3
TRABAJOS
ENVIADOS Y AUN NO ACEPTADOS PARA SU PUBLICACION.
7.4
TRABAJOS
TERMINADOS Y AUN NO ENVIADOS PARA SU PUBLICACION.
7.4.1. Pardo, M., M.
Bruno, C. Sequeiros, S. Trejo, L. López, N. Caffini and C. Natalucci. “Electrophoretical analysis of
bovine casein hydrolysates produced by four new plant endopeptidases”. J.
Dairy Res.
Resumen:
Partially purified extracts of four cysteine
plant endopeptidases with basic optimum pH (balansain, hieronymain, asclepain f
and philibertiain g, isolated from Bromelia balansae Mez, B.
hieronymi Mez, Asclepias fruticosa L. and Philibertia gilliesii
Hook. et Arn., respectively), were assayed on bovine casein. Milk
coagulation behaviour was different for the assayed proteases: balansain and
hieronymain have a similar behaviour (0.41 and 0.29 clotting units,
respectively), whereas asclepain f exhibits the lower coagulation activity. In
absence of cysteine, philibertain g did not exhibit clotting activity, but the
addition of low cysteine levels (10 mM) promoted the higher coagulation
activity. Degradation of the different casein fractions was followed by
SDS-Tricine gel electrophoresis and analysis of the corresponding densitograms.
The αS1- and αS2-casein fractions, associated with
cheese texture, showed different degradation patterns: higher degradation
kinetics was obtained for philibertain g, followed by balansain and
hieronymain, while asclepain f showed the lower activity. The β-casein fraction, related to
bitterness, showed a similar initial degradation kinetics for balansain and
asclepain f; degradation is faster in the case of philibertain g and slower for
hieronymain. In the case of the k-casein fraction, involved in milk coagulation,
the most remarkable behaviour is that of hieronymain, because the band is not
detectable after 10 min incubation. Philibertain g and balansain showed similar
hydrolysis patterns, while asclepain f reaches maximum percent degradation
(55%) after 30 min.
7.4.2. Vairo-Cavalli, S.E., S. Claver, N.S. Priolo y
C.L. Natalucci. “Action
of aspartic proteinases from Silybum marianum (L.) Gaernt. on bovine
caseinate”. J. Dairy Res.
Resumen:
Proteolytic enzymes were extracted from liquid
nitrogen frozen fresh flowers of Silybum marianum (L.) Gaertn. at pH 3.0
and pH 7.0. Both crude extracts evidenced milk clotting activity but the acidic
extraction is more advantageous as eliminates most proteinic contaminants. Gel
filtration of the acidic crude extract (Sephadex
G-25) allowed remotion of lower molecular weight non proteinic
contaminants such as phenolic compounds, affording a partially purified enzyme
preparation (protein content: 264 ± 4 mg/l; milk clotting activity: 0.083 rennet
units; proteolytic activity: 0.64 ± 0.01 Anson units). The effect of PMSF (serine
protease inhibitor), E-64 (cysteine protease inhibitor), and pepstatin A
(aspartic protease inhibitor) were tested on the milk clotting activity, but
only pepstatin A showed inhibition, indicating that the proteolytic enzymes
belonged to the aspartic peptidases group. The addition of NaCl to milk
decreased the clotting activity in an exponencial decay manner. Conversely,
when the CaCl2 content in milk was increased, the milk clotting
activity increased up to a 30 mM-CaCl2 concentration. The enzymes
showed poor stability at 37 ºC (only 23 ± 1 % of initial milk clotting activity was
retained after 60 min at 37 oC), that may be attributed to
autohydrolysis. Optimum proteolysis (acid-denatured hemoglobin) was achieved
around pH 3.8. Degradation of the different casein fractions was followed by
SDS-Tricine- and urea-gel electrophoresis and analysis of the corresponding
densitograms, showing specific degradation patterns.
7.5
COMUNICACIONES.
7.5.1. Brutti, C., N. Apóstolo y C.L. Natalucci.
“Expresión de endopeptidasas aspárticas y diferenciación de traqueidas en
callos de Onopordom acanthium L. (Asteraceae). XI Reunión
Latinoamericanade Fisiología Vegetal, XXIVReunión Argentina de Fisiología
Vegetal y I Congreso Uruguayo de Fisiología Vegetal, Punta del Este, Uruguay,
22-25 de octubre de 2002.
7.5.2. Sequeiros, C., L.M.I. López, J.L. Esteves y C.L. Natalucci. “Hidrólisis de las proteínas de agua de cola de pescado empleando una fitoproteasa obtenida del látex de Philibertia gillesii”. I Congreso Latinoamericano de Fitoquímica. Buenos Aires, 8-10 de mayo de 2002.
7.5.3. Pardo, M.F., C.L. Natalucci y N.O. Caffini. “Actividad coagulante en extractos de frutos de Bromelia balansae Mez (Bromeliaceae)”. I Congreso Latinoamericano de Fitoquímica. Buenos Aires, 8-10 de mayo de 2002.
7.5.4. Vairo Cavalli, S.E., C. Brutti, C.L. Natalucci, N.S. Priolo. “Proteasas coagulantes de leche obtenidas de flores de dos especies de cardos”. I Congreso Latinoamericano de Fitoquímica. Buenos Aires, 8-10 de mayo de 2002.
7.5.5. Vairo Cavalli, S.E., Priolo, N.S., Natalucci, C.L., and Caffini, N.O. “Plant aspartic proteinases with milk clotting activity”. XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular, Carlos Paz, noviembre de 2001.
7.5.6. Bruno, M.A., Pardo, M.F., Trejo, S.A., Sequeiros, C., López, L.M.I., Caffini, N.O., and Natalucci, C.L. “Electrophoretical analysis of casein hydrolysates produced by plant endopeptidases”. XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular, Carlos Paz, noviembre de 2001.
7.5.7. Trejo, Sebastián A., M.J. Torres, I. Sayavedra, C.L. Natalucci y L.M.I. López. “Hidrólisis enzimática de proteínas alimentarias utilizando asclepaína f”. Jornadas Bromatológicas 2001. La Plata, 14-16 de noviembre de 2001.
7.6
INFORMES
Y MEMORIAS TECNICAS.
8.
TRABAJOS
DE DESARROLLO DE TECNOLOGÍAS.
8.1
DESARROLLOS
TECNOLÓGICOS.
8.2
PATENTES
O EQUIVALENTES.
8.3
OTRAS
ACTIVIDADES TECNOLÓGICAS CUYOS RESULTADOS NO SEAN PUBLICABLES
9.
SERVICIOS
TECNOLÓGICOS
9.1. Desarrollo para la obtención de papaína hidrosoluble. Cooperativa Telefónica de Libertador Gral. San Martín. Desde el mes de agosto de 2002. El desarrollo es coordinado por la Dra. Laura María Isabel López, Investigadora Adjunta de CONICET. Se realizó un convenio inicial durante el año 2002 que se extendió a todo el año 2003 por el que la Cooperativa abona $ 1.000 mensuales a la Facultad de Ciencias Exactas para el pago de los gastos que demanda la realización del servicio encomendado. Como integrante del Grupo Asesor del LIPROVE para la ejecución del convenio participo en reuniones con los representantes de la Cooperativa y con el personal del LIPROVE encargado de la ejecución de las tareas. El tiempo estimado es de 2 horas semanales.
9.2. Preparación de reactivos, soluciones de referencia y de
calibración para la determinación de proteínas en granos de cereales y en
pellets de girasol, encomendados por Laboratorios Delver de La Plata. Los
servicios se prestan desde hace varios años e implicaron la validación del
método y el control de calidad de los reactivos y equipos. En este momento la
empresa deberá abonar $ 5.000 a la Facultad de Ciencias Exactas por el servicio
encomendado. El desarrollo y los sucesivos servicios han sido coordinados por
el Dr. Néstor Caffini y por mí, ambos investigadores independientes de CIC. El
tiempo estimado es de 1 hora semanal, durante dos meses.
10.
PUBLICACIONES
Y DESARROLLOS EN:
10.1
DOCENCIA
10.2
DIVULGACIÓN
11.
DIRECCION
DE BECARIOS Y/O INVESTIGADORES.
Bioqca. Sandra Vairo Cavalli. Beca de Postgrado del
CONICET. Tema: “Aislamiento, purificación y caracterización de endopeptidasas
aspárticas de origen vegetal. Su aplicación en la industria del queso”. Desde
el 1°
de abril de 2000. Dirección.
Qco. Sebastián A. Trejo. Beca de Entrenamiento de la CICPBA. Tema: "Fitoproteasas de aplicación en la industria alimentaria: a) purificación y caracterización de proteinasas de Asclepias fruticosa; b) estudio preliminar de los precursores nucleotídicos de macrodontaina II". Desde el 1° de septiembre de 1999 al 31 de agosto de 2001. Dirección.
Bioqca. Cynthia Sequeiros Beca de Posgrado del CONICET
Tema: "Aislamiento y caracterización de endopeptidasas de plantas de la
Patagonia. Su empleo en el aprovechamiento de desechos de la industria pesquera
para la obtención de concentrados peptídicos de uso alimentario.". Desde
el 1°
de abril de 2001. Dirección.
Bioqco. Marcelo Fabián Pardo. Beca de
Perfeccionamiento de la UNLP. Tema: “Aislamiento, purificación y
caracterización de proteasas de Bromeliaceae destinadas a la obtención
de proteínas modificadas para uso
alimentario". Desde el 1° de mayo de 2001 al 30 de abril de 2003. Codirección
Bioqco. Sebastián A. Trejo. Beca de Posgrado Mixta del CONICET Tema: "Purificación, caracterización y expresión de endopeptidasas cisteínicas de origen vegetal, para su empleo en tecnología de alimentos”. Desde el 1° de abril de 2002. Codirección.
12. DIRECCION DE TESIS.
Bioqco. Sebastián
Alejandro Trejo
Tesis para optar al Doctorado de la Facultad de Ciencias Exactas de la Universidad Nacional de La Plata. Tema: "Purificación, Caracterización y Expresión de Endopeptidasas Cisteínicas de Origen Vegetal, para su Empleo en Tecnología de Alimentos”. Etapa intermedia de los trabajos experimentales. Codirectora: Dra. L.M.I. López.
Ing. Agrónoma Cristina
Brutti
Tesis para optar al Doctorado de la Facultad de Ciencias Exactas de la Universidad Nacional de La Plata. Tema: "Peptidasas aspárticas presentes en especies de la Tribu Cynareae (Familia Asteraceae) expresadas in vivo e in vitro”. Etapa intermedia de los trabajos experimentales. Codirector Ing. Agr. Luis Mroginski
Bioqca. Cynthia
Sequeiros
Tesis para optar al Doctorado de la Facultad de Ciencias Exactas de la Universidad Nacional de La Plata. Tema: "Purificación y caracterización de las proteasas de Bromelia laciniosa Mart. (Bromeliaceae) y su aplicación en la modificación de proteínas alimentarias.” Etapa intermedia de los trabajos experimentales.
Bioqco. Marcelo Fabián
Pardo
Tesis para
optar al Doctorado de la Facultad de Ciencias Exactas de la Universidad
Nacional de La Plata. Tema: "Aislamiento y purificación de proteasas de
especies pertenecientes al género Bromelia que crecen en el nordeste de
nuestro país, destinadas a la obtención de proteínas modificadas para
uso alimentario" Etapa de redacción.
Bioqca. Sandra Vairo
Cavalli
Tesis para optar al Doctorado en Bioquímica, Facultad de Ciencias Exactas de la Universidad Nacional de La Plata. Tema: “Aislamiento, purificación y caracterización de endopeptidasas aspárticas de origen vegetal. Su aplicación en la industria del queso”. Etapa intermedia de los trabajos experimentales. Función Codirección. Dirección Prof. Dra.. Nora S. Priolo
13. PARTICIPACION EN REUNIONES CIENTIFICAS.
13.1. I Congreso Latinoamericano de Fitoquímica. Buenos Aires, 8-10 de mayo de 2002. Presentación de póster. “Actividad coagulante en extractos de frutos de Bromelia balansae Mez (Bromeliaceae)”, Pardo, M.F., C.L. Natalucci y N.O. Caffini.
13.2. XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular, Carlos Paz, noviembre de 2001. Presentación de póster. “Electrophoretical analysis of casein hydrolysates produced by plant endopeptidases”, Bruno, M.A., M.F. Pardo, S.A. Trejo, C.Sequeiros, L.M.I. López, N.O. Caffini, and C.L. Natalucci,
14. CURSOS DE PERFECCIONAMIENTO, VIAJES DE ESTUDIO, ETC.
14.1. Curso
de “Especialización en Gestión Tecnológica”. Dirigido y dictado
por el Ing. Oscar Galante (FONTAR), con la colaboración de la Dra. María Clara
Lima. Coordinado por el Ing. Raúl Pessacq. Duración 40 horas.
Septiembre-Noviembre de 2002.
15. SUBSIDIOS RECIBIDOS EN EL PERIODO.
·
Proyecto: “Fitoproteasas de Aplicación Industrial”. CONICET. PIP-02813. Años 2001-2003. Codirectora
del Proyecto.
·
“Aplicación industrial de enzimas proteolíticas de
vegetales superiores”. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica.
Programa FONCYT. Código Subsidio PICT 2000 – 9916. Integrante del Grupo
Responsable.
16. DISTINCIONES O PREMIOS OBTENIDOS EN EL PERIODO.
17. ACTUACION EN ORGANISMOS DE PLANEAMIENTO, PROMOCION O
EJECUCION CIENTIFICA Y TECNOLÓGICA.
18. TAREAS DOCENTES DESARROLLADAS EN EL PERIODO.
Funciones
cumplidas durante los años 2002 y 2003
Profesor Adjunto de Biología. Durante el curso lectivo 2003, dado el incremento en el número de alumnos de Biología, he cumplido las funciones inherentes al cargo citado, las que fueron comunicadas por nota del Prof. Dr. Néstor O. Caffini del 7 de marzo de 2003 y cuyo reconocimiento fuera solicitado por nota del Prof. Dr. Néstor O. Caffini del 7 de mayo de 2003.
Jefe de Trabajos Prácticos de Biología. Durante el curso lectivo 2002 me he desempeñado en la citada materia dado que la materia Botánica (carrera de Bioquímica) de la cual es originario el cargo que poseo no ha sido dictada del modo normal a causa de su desaparición de los nuevos Planes de Estudio implementados por la Facultad.
Porcentaje del tiempo total de trabajo dedicado a tareas
docentes
Según los nuevos Planes de Estudio de
nuestra Facultad y la materia en la que me he desempeñado, las tareas docentes
las he realizado durante el primer semestre, cumpliendo doble carga horaria. El
promedio, considerando el año en su conjunto, fue de un 20% del total.
19. OTROS ELEMENTOS DE JUICIO NO CONTEMPLADOS EN LOS
TITULOS ANTERIORES.
19.1. PARTICIPACIÓN EN
COMISIONES
· Actuación en la Unidad de Transferencia Tecnológica de la Facultad de Ciencias Exactas de la UNLP. Años 2001-2002
· Elaboración, junto a otros miembros de la Unidad de Transferencia Tecnológica de nuestra Facultad, de la Carpeta de Alimentos para ser presentada al Medio Productivo. Año 2002.
19.2. PARTICIPACIÓN EN
JORNADAS Y REUNIONES
· Seminario-Taller “Una cuestión estratégica, una intensa vinculación entre el sector científico tecnológico y el sector productivo”. Organizado en el marco del “Curso de Especialización en Gestión Tenológica”. 4 de noviembre de 2002
· “Jornada de Difusión y Discusión sobre Extensión Universitaria en la Facultad de Ciencias Exactas”. 2 de octubre de 2002
· “2º Seminario-Taller de Calidad en Laboratorios de la UNLP”. Organizada por la Dirección de Vinculación Tecnológica, Secretaría de Relaciones Institucionales, Universidad Nacional de La Plata. 27 de septiembre de 2002.
· “Taller de Calidad en los Laboratorios de la UNLP”. 11 de junio de 2002.
· Jornada de Lanzamiento de EmpreCIC, Programa de AsistenciaCientífico-Tecnológica para PyMES Industriales Bonaerenses. Organizada por la CIC. 4 de junio de 2002.
· “1º Seminario-Taller de Calidad en Laboratorios de la UNLP”. Organizada por la Dirección de Vinculación Tecnológica, Secretaría de Relaciones Institucionales, Universidad Nacional de La Plata. 21 de mayo de 2002
· “I Jornada de Vinculación Tecnológica”. Organizada por la Dirección de Vinculación Tecnológica, Secretaría de Relaciones Institucionales, Universidad Nacional de La Plata. 7 de diciembre de 2001.
20. TITULO Y PLAN DE TRABAJO A REALIZAR EN EL PROXIMO
PERIODO.
TÍTULO: “ENZIMAS PROTEOLITICAS DE VEGETALES
SUPERIORES”.
Durante el
período 2003-2005 se continuará con la formación de recursos humanos (dirección
de tesistas y dirección y dictado de un curso de posgrado sobre
electroforesis). Los planes de cada una de las líneas que dirijo poseen un
aspecto relacionado al conocimiento bioquímico básico de una nueva enzima
proteolítica y otro vinculado a la aplicación de dicha enzima en la hidrólisis
parcial de diferentes proteínas de interés para la industria alimentaria. Este
último aspecto puede ser transferido al sector productivo.
Por otra
parte, nuestro laboratorio está decidido a incrementar las actividades de
transferencia tecnológica y de servicios, tema en el que estoy personalmente
involucrada. Para cumplir este objetivo se ha comenzando la capacitación de
miembros del LIPROVE en esta función. En estos momentos estoy actuando como
tutora de la Qca. Cecilia Cimino que ha recibido un subsidio del “Programa de
subsidios para formación en gestión y transferencia de tecnología”,
implementado la CIC y en el nuevo período continuaré actuando dentroy fuera del
laboratorio para lograr el fin propuesto.
Otro
aspecto en el que estoy directamente comprometida es en la relación de nuestro
laboratorio con otros grupos de investigación de nuestro país y del exterior.
En este sentido será importante la ejecución del proyecto que recientemente ha
aprobado el CYTED sobre enzimas proteolíticas, y en cuya elaboración he
participado, así como la presentación de un proyecto de cooperación entre
nuestro país y Cuba.
Los avances
que me propongo obtener en las diferentes líneas de trabajo se resumen a
continuación.
20.1. Proteasas de Bromelia balansae (balansaína)
·
Fin de la corrección del trabajo de Tesis Doctoral del
Bioqco. Marcelo F. Pardo. Discusión de las defensa de la misma.
20.2. Proteasas de Asclepias fruticosa (asclepaína f)
· Obtención de los cDNAs correspondientes a la proteasa
· Amplificación por PCR del cDNA de interés
· Clonado y secuenciamiento del cDNA de la proteasa en estudio
· Iniciación de los experimentos tendientes a definir el sistema más adecuado para lograr la expresión de la endopeptidasa en E. coli
· Caracterización cinética de la proteasa purificada.
· Estudios de especificidad de la proteasa empleando péptidos de bajo PM
· Hidrólisis parcial de proteínas alimentarias utilizando las preparaciones enzimáticas parcialmente purificadas
· Análisis electroforético de los péptidos obtenidos por hidrólisis parcial
20.3. Proteasas de Plantas de la Flora Patagónica
· Hidrólisis parcial de agua de cola con la enzima obtenida
· Análisis electroforético de los péptidos resultantes
· Concentración de hidrolizados y toma de muestra a diferentes tiempos
· Análisis electroforético de los péptidos presentes en los concentrados
· Determinación de viscosidad de los concentrados
· Purficación por intercambio catiónico (FPLC) de una o más proteasas a partir de la preparación parcialmente purificada.
· Caracterización de la/s mismas.
20.4 . Proteasas de Syllibum marianum
· Aplicación de las proteasas parcialmente purificadas sobre caseinatos bovinos, ovinos y caprinos en diferentes condiciones
· Purificación de la proteinasa aspártica por intercambio iónico empleando un gradiente de pH
· Caracterización de la proteasa purificada
· Determinación del N-terminal y masa molecular de la proteasa purificada
· Cultivo in vitro de callos obtenidos a partir de explantos de la especie en estudio
· Evaluación de la producción de proteasas en los callos obtenidos